Método en VAMS
"Volumetric Absorptive Microsampling (VAMS) for assaying immunosuppressants from venous whole blood by LC- MS/MS using a novel atmospheric pressure ionization probe (UniSpray™)"
- Primer uso de la fuente de ionización UniSprayTM para aumentar la sensibilidad de los inmunosupresores. De hecho, fue la tercera publicación a nivel mundial que utilizó dicha fuente de ionización para cualquier aplicación analítica.
- En las muestras de micromuestreo, los procedimientos desarrollados fueron simples, rápidos y altamente sensibles, alcanzando los LLOQ (límites bajos de cuantificación) más bajos reportados en la literatura para todos los inmunosupresores.
- Ambas metodologías de micromuestreo estudiadas fueron completamente validadas, informando del estudio de estabilidad más largo para inmunosupresores en micro muestras de sangre seca existente hasta el momento.
- Además, las validaciones cumplen con las recomendaciones de la (en aquel momento recién "salida del horno") "Directriz Oficial de la Asociación Internacional para el Monitoreo Terapéutico de Fármacos y Toxicología Clínica: Desarrollo y Validación de Métodos Basados en Muestras de Sangre Seca para el Monitoreo Terapéutico de Fármacos" (Official International Association for Therapeutic Drug Monitoring and Clinical Toxicology Guideline: Development and Validation of Dried Blood Spot-Based Methods for Therapeutic Drug Monitoring).
- Primer aplicación de las Mitra VAMS a muestras reales para la determinación de inmunosupresores.
- Primera validación clínica para el ácido micofenólico en Mitra VAMS.
El monitoreo terapéutico de fármacos (TDM) inmunosupresores (IMS) es crucial para prevenir el rechazo o la toxicidad después de un trasplante de órgano sólido. Las técnicas de micromuestreo (muestreo <50 μL de sangre) pueden ser una buena alternativa al muestreo venoso convencional para el TDM, debido a sus numerosas ventajas, que incluyen un muestreo fácil y de bajo impacto, que permite la auto recolección, así como un envío y almacenamiento económicos. Además, el muestreo microabsorbente volumétrico (VAMS) permite la recolección de volúmenes precisos y exactos de sangre, superando el efecto del hematocrito (Hct) relacionado con las muestras de sangre seca, al tiempo que ofrece los mismos beneficios. En este trabajo, se desarrolló y validó un método de LC-MS/MS para la determinación de los 5 IMS más comunes (ácido micofenólico -MPA-, tacrolimus -TAC-, sirolimus -SIR-, everolimus -EVE- y ciclosporina A -CsA-) en sangre venosa recolectada con dispositivos VAMS Mitra™, utilizando una novedosa interfaz LC-MS/MS, Unispray™. El método fue completamente validado, incluyendo linealidad, límites de detección (LOD) y cuantificación (LLOQ), precisión, exactitud, selectividad, arrastre, efecto de matriz, recuperación, impacto del Hct en la recuperación y estabilidad a corto/largo plazo, cumpliendo con los criterios de aceptación en todos los casos. Las LLOQs fueron de 0.5 ng/mL para TAC, SIR y EVE, 20 ng/mL para CsA y 75 ng/mL para MPA. No se encontró ningún impacto del Hct (rango: 0.2 a 0.62 L/L) en la recuperación de ningún analito. Todos los compuestos fueron estables en VAMS durante al menos 8 meses a -20 °C. Además, como parte de la validación del método analítico de VAMS, realizamos por primera vez un amplio estudio estadístico para comparar las concentraciones de sangre venosa líquida de pacientes bajo tratamiento con TAC (n=53) y MPA (n=20) con aquellas observadas cuando las mismas muestras se absorbieron en VAMS. Nuestros resultados mostraron que las concentraciones de VAMS de sangre venosa estaban correlacionadas con las encontradas en la sangre venosa líquida original, demostrando que el material VAMS en sí no sesgará las concentraciones de medicamentos en sangre. Por lo tanto, el presente método podría aplicarse para evaluar posibles correlaciones entre la sangre venosa y la sangre capilar recolectada con VAMS.
Abstract
Therapeutic drug monitoring (TDM) of immunosuppressants (IMS) is crucial to prevent rejection or toxicity after solid organ transplantation. Microsampling techniques (sampling <50 μL of blood) can be a good alternative to conventional venous sampling for TDM, due to their numerous advantages, including its easy and low-invasive sampling, enabling self-collection, and cost-saving shipment and storage. Furthermore, volumetric absorptive microsampling (VAMS) enables the collection of precise and accurate blood volumes, overcoming the hematocrit (Hct) effect related to dried blood spots, while offering the same benefits. In this work, an LC-MS/MS method for the determination of the 5 most common IMS (mycophenolic acid -MPA-, tacrolimus -TAC-, sirolimus -SIR-, everolimus -EVE- and cyclosporin A -CsA-) in venous blood collected with Mitra™ VAMS devices was developed and validated, employing a novel LC-MS/MS interface, Unispray™. The method was fully validated including linearity, limits of detection (LOD) and quantification (LLOQ), accuracy, precision, selectivity, carry-over, matrix effect, recovery, impact of Hct on recovery and autosampler and short-/long-term stability, satisfying acceptance criteria in all cases. LLOQs were 0.5 ng/mL for TAC, SIR and EVE, 20 ng/mL for CsA and 75 ng/mL for MPA. No impact of the Hct (range: 0.2 to 0.62 L/L) on recovery was found for any analyte. All compounds were stable in VAMS for at least 8 months at -20 °C. In addition, as part of the VAMS analytical method validation, we performed for the first time a broad statistical study to compare liquid venous blood concentrations from patients under TAC (n=53) and MPA (n=20) treatment to those observed when the same specimens were absorbed into VAMS. Our results showed that venous blood VAMS concentrations were correlated to those found in the original liquid venous blood, proving that the VAMS material itself will not bias blood drug concentrations. Therefore, the present method could be applied to evaluate possible correlations between venous blood and capillary blood collected with VAMS.